鱟先天性免疫系統(tǒng)*依賴于一套獨(dú)-特且非常有效的宿主防御系統(tǒng)和凝血系統(tǒng)。目前人們已從鱟血淋巴的血細(xì)胞和血漿中分離純化了多種參與鱟凝血反應(yīng)和宿主防御的免疫應(yīng)答因子。今天主要講解是的凝固因子。
一、凝固因子(coagulation factors)
鱟血淋巴進(jìn)行快速凝血對宿主防御和止血均非常重要[1,2]。該凝血級聯(lián)反應(yīng)由4種凝固因子和1種凝固蛋白原(cogaulogen)組成。其中凝固因子包括C因子、G因子、B因子及前凝固酶(proclotting enzyme),這些因子都屬于絲-氨-酸蛋白酶原家族。
1.C因子
C因子為糖蛋白,是鱟凝血反應(yīng)中由細(xì)菌內(nèi)毒素(LPS)激活的凝血級聯(lián)反應(yīng)的起始點(diǎn)。分子質(zhì)量為123 ku,由輕、重二鏈通過二硫鍵組成,其重鏈N端可以與LPS特異結(jié)合,而輕鏈C端有催化活性。在 LPS作用下C因子被活化,活化的c因子有酰氨化酶活性,可激活B因子。B因子進(jìn)一步將前凝固酶活化為凝固酶。這一絲氨酸蛋白酶的級聯(lián)活化最后使凝固蛋白原轉(zhuǎn)化為凝固蛋白凝膠。
基于該原理利用鱟血細(xì)胞崩解物制成的鱟試劑,已被廣泛應(yīng)用于LPS檢測。這種細(xì)菌內(nèi)毒素檢測方法即“鱟試驗(yàn)法",自1968年提出后,已被陸續(xù)納入各國藥典[3]。
2.B因子
B因子是C因子的靶因子,分子質(zhì)量約64 ku,在活化的C因子的激活下﹐B因子可將前凝固酶活化為凝固酶。
3.G因子
G因子是鱟凝血反應(yīng)的另一起始點(diǎn),是一種特殊的絲氨酸蛋白酶原,為異二聚體,可被真菌細(xì)胞壁組分(1→3)-β- D-葡聚糖特異性激活[4]。
4.前凝固酶
前凝固酶分子質(zhì)量約38 ku,由346個氨基酸組成??杀换罨?/span>B因子或C因子激活為凝固酶,凝固酶可進(jìn)一步活化凝固蛋白原,形成不可溶的凝固蛋白凝膠。
5.凝固蛋白原(coagulogens)
目前已從美洲鱟、中國鱟及2種東南亞鱟體內(nèi)獲得4種凝固蛋白原。凝固蛋白原是鱟凝血系統(tǒng)的核心,是凝血級聯(lián)反應(yīng)的的靶蛋白,與脊椎動物的纖維蛋白原功能相似,但不同的是凝固蛋白原是在血細(xì)胞的大顆粒內(nèi)而不存在于血漿中。凝固蛋白原是堿性多肽鏈,由3個片段(A、B、C)組成。在凝膠化過程中,C肽被釋放出來,最終形成的凝固蛋白凝膠分子由A、B二條鏈以二硫鍵連接而成。
參考文獻(xiàn):
1.Muta T, Iwanaga S . The role of hemolymph coagulation in innate immunity[J].Curr Opin Immuno, 1996, 8:41-47.
2.Muta T, Iwanaga S. Clotting and immune defense in Limulidae[J] . Prog Mol Subcell Biol, 1996, 15:154-189.
3.Ding J L, Ho B. A new era in pyrogen testing[J] . Trends Biotech, 2001, 19(8):277-281.
4.Takaki Y, Seki N, Kawabata S S, et al . Duplicated binding sites for ( 1→3)-beta-D-glucan in the hor-seshoe crab coagulation factor G implications for a molecular basis of the pattern recognition in innate immunity[J] . J Biol Chem, 2002, 277(16):14 281-14 287.