鱟系海產(chǎn)動物,生物學分類上屬節(jié)肢動物門肢口綱劍尾目。在其血液中含有一種特殊的變形細胞(amoebocyte)。這種變形細胞中含有能被內毒素激活的C因子、B因子、前凝固蛋白,因此,內毒素檢測LT法(鱟變形細胞溶解物試驗)的機理即是內毒素通過激活C因子、B因子、前凝固酶,而使可凝固蛋白變成凝固蛋白(肉眼可見的凝膠),從而可以半定量及定量地測知內毒素的含量(圖1)。
日本學者在對可凝固蛋白氨基酸順序研究的基礎上,發(fā)現(xiàn)內毒素激活的凝固酶的作用點為可凝固蛋白的第18(Arg)和19(Ghr)間的肽健,以及第46(Arg)和47 (G1y)間的肽鍵,而裂解為A鏈、B鏈及C肽。且在切斷部位的羧基端氨基酸的結構均為-G1y-Arg,提出此酶的作用有特異性(圖2)。產(chǎn)色基質內毒素檢測法即是據(jù)此原理而設計的。
一般地講,內毒素與鱟試劑的反應是非常特異的,因此,LT法的假陽性極少。從革法蘭氏陽性菌分離出的肽聚糖雖亦能凝固鱟試劑,但其活性比內毒素低1000~ 400000倍。
近來發(fā)現(xiàn)一種新的合成抗癌劑羧甲基(1→3)-β-D-葡聚糖亦能與鱟試劑起反應。其反應原理是:鱟試劑中含有一種稱為G因子的物質,此抗癌劑能激活鱟試劑中的G因子,而活化的G因子又依次激活前凝固酶、可凝固蛋白,從而形成凝膠(圖2)。至此凝血酶、凝血激酶,Poly I:CPo1yA:U、核糖核酸酶、胰蛋白酶等,亦可凝固鱟試劑而引起假陽性反應。但用氯仿處理此等物質(浸取3~4小時)可以除去這些物質,從而可避免發(fā)生假陽性反應。
哺乳類動物血漿中含一種酯酶,它對內毒素有降解及脫毒的作用,故用LT法檢測血漿中的內毒素易受此種物質的影響,而造成假陰性結果。為了避免此等因素的影響,在試驗前血漿需經(jīng)過特殊處理。目前共有下述四種方法處理血漿,即稀釋加熱法、酸化值液、氯仿浸取法及凝膠過濾法。我們及其它的一些工作者認為稀釋加熱法簡便易行,效果較好。
在鱟血液中,還有一種稱之為抗LPS因子(Anti - LPS - factor,ALF)的蛋白物質,分子量約為15KDa,為一種鱟血抗凝劑,對LPS介導的LT反應有直接的抑制作用。ALF可抑制LPS對LT反應的初始.階段。因此在制備鱟試劑時,應將此物質清除。氯仿浸取法可有效去ALF。除去ALF及加入Ca++ (o.o2M)可改善鱟試劑的質量,提高敏感性約100倍。